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粗提取与鉴定DNA材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。实验材料的选取原则上,凡是含有DNA的生物材料都可以考虑,但是,选用DNA含量相对较高的生物组织,成功的可能性更大 鸡是真核生物,真核生物的DNA主要在染色体上。
鸟类的血细胞核大,DNA多
不需要破除细胞壁
问题:鸡血细胞液在取材之后,到实验前,是否需要特殊处理吗?
柠檬酸钠抗凝问题:鸡血细胞虽然没有细胞壁,但是依然有细胞膜,以你所学的知识,有什么比较简便但是可行的方法可以破碎细胞膜?一、提取血细胞核物质(动物)讨论:为什么加入蒸馏水能
使鸡血细胞破裂?
洗涤剂的作用:
洗涤剂也分为亲水基团和亲脂基团,可以与细胞膜中的蛋白质结合,使之溶解,进而瓦解细胞膜。
食盐的作用:
食盐中主要含有NaCl,有利于DNA的溶解。 问题:这时的滤液可能含有哪些细胞成分?
主要有DNA、RNA、核蛋白、多糖等
我们应该如何将DNA单独分离出来?DNA溶解在浓度较高的NaCl溶液溶液中①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图,思考在什么浓度下,DNA的溶解度最小? DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的?②如何通过控制NaCl溶液的浓度使 内容过长,仅展示头部和尾部部分文字预览,全文请查看图片预览。 15min→DNA滤液。
大多数蛋白质不能忍受60-80 ℃的高温,而DNA在80 ℃以上才会变性
利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同,从而使蛋白质变性,与DNA分离。七、提取含杂质较少的DNA
纯化:向滤液中贴壁缓慢加入50mL冷却的体积分数为95%乙醇,并用玻璃棒朝一个方向缓慢、均匀地搅拌,溶液中会出现含杂质较少的DNA丝状物。
用玻璃棒将丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分。注意观察:丝状物是什么颜色的?白色八、DNA的鉴定溶解:在物质的量浓度为0.015mol/L的NaCl溶液5mL,放入丝状物,用玻璃棒搅拌,使之溶解。
显色:加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后,将试管置于沸水中加热5min。问题:如果溶液变蓝是否能说明DNA的存在?
设置对照组
除了可以使用二苯胺法,还有什么方法可以鉴定DNA?
用甲基绿溶液直接滴在有DNA丝状物的载玻片或玻棒上,呈绿色反应1、以血液为实验材料时,每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠,防止血液凝固。
2、加入洗涤剂后,动作要轻缓、柔和,否则容易产生大量的泡沫,不利于后续步骤的操作。加入酒精和玻璃棒搅拌时,动作要轻缓,以免加剧DNA分子的断裂,导致DNA分子不能形成絮状沉淀。
3、二苯胺试剂要现配现用,否则会影响鉴定的效果。注意事项[文章尾部最后300字内容到此结束,中间部分内容请查看底下的图片预览]
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