细菌学检验内容
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细菌L型(细胞壁缺陷型):某些药物作用于细菌，可抑制的肽聚糖的合成或破坏细胞壁的结构，在高渗环境下，细菌仍可存活，成为细胞壁缺陷型。
感染的结局：隐性感染、显性感染(局部、全身)、带菌状态
①菌血症(bacteremia）：致病菌由局部侵入血流，但未在血流中生长繁殖，只是短暂的一过性通过血循环到达体内适宜部位后再进行繁殖而致病。
②败血症(septicemia)：致病菌侵入血流后，在其中大量繁殖并产生毒性产物，引起全身性中毒症状。鼠疫耶氏菌、炭疽芽胞杆菌等。
③脓毒血症(pyemia):化脓性病菌侵入血流后，在其中大量繁殖，并通过血流扩散至宿主体的其他组织或器官，产生新的化脓性病灶。例如金黄色葡萄球菌的脓毒血症，常导致多发性肝脓肿、皮下脓肿和肾脓肿等。
④毒血症(toxemia)：致病菌侵入宿主体后，只在机体局部生长繁殖，病菌不进入血循环，但其产生的外毒素入血。外毒素经血到达易感的组织和细胞，引起特殊的毒性症状。例如白喉、破伤风等。
⑤内毒素血症(endotoxemia)革兰阴性菌侵入血流，并在其中大量繁殖、崩解后释放出大量内毒素；也可由病灶内大量革兰阴性菌死亡、释放的内毒素入血所致。
带菌状态：有时致病菌在显性或隐性感染后并未立即消失，在体内继续留存一定时间，与机体免疫力处于相对平衡状态。 宿主------带菌者（carrier)，重要的传染源
噬菌体的常规试验稀释度（RTD）：刚好不引起噬斑融合的噬菌体最高稀释度即该噬菌体的
＊＊名词解释：MIC(凡无肉眼可见细菌生长的药物最低浓度)、MBC(观察到能杀死99.9%原始种入细菌的最低药物浓度，最低杀菌浓度)
1.噬菌体分型的依据是什么？
答：①细菌的鉴别与用于分型的噬菌体的裂解特征必须稳定，如两者之中任何一个因素易于改变，可致分型结果的重复性差，则不适宜采用此方法分型。②噬菌体应具备较高分型效率，即细菌噬菌体分型方法能够区别菌株之间细微的差别，能将一种细菌区分为许多不同的型别。③操作方法简便易行，实验耗时短，结果记录简明。④所用方法应能标准化，便于结果比较。⑤易制备高效价的噬菌体原某某，并可稳定保存较长时间；噬斑清晰，大小适中，便于观察及准确记录。
2.K-B法的实验原理？
答：将含定量抗菌药物纸片贴在已接种待测细菌的琼脂平板表面，培养后，形成一个透明抑菌环，环的大小反映待测菌对该药物的敏感程度。
(将含有一定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种待测细菌的琼脂培养基表面，纸片中所含
的药物吸收琼脂培养基中的水分溶解后，向纸片周围区域均匀扩散，形成以纸片为中心递减
的药物浓度梯度。（当纸片周围一定区域内的药物浓度高于抑制待测菌所需浓度时，则该区
城内细菌不能生长，***仍然可以正常生长，从而在培养基上形
成一个无菌生长的透明圈，即抑菌圈）抑菌圈大小可反映细菌对药物的敏感程度。)
3.简述脉冲场凝胶电泳分型技术的原理。
答：电场不断在两种方向（有一定夹角，而不是相反的两个方向）变动。DNA分子带有负电荷，会朝正极移动。相对较小的分子在电场转换后可以较快转变移动方向，而较大的分子在凝胶中转向较为困难。因此小分子向前移动的速度比大分子快。脉冲场凝胶电泳可以用来分离大小从10kb到10Mb的DNA分子。
八 革兰阳性球菌
一、掌握常见革兰阳性球菌的病原学特性，熟悉其致病性及流行病学特征二、掌握常见革兰阳性球菌的实验室检验方法
31.葡萄球菌属：①排列呈葡萄状。无芽胞、鞭毛，大多数在显微镜下观察无荚膜。
②需氧或兼性厌氧，最适生长温度37℃、PH7.42
对营养要求不高，在普通培养基中生长良好，加少量葡萄糖或血液生长更旺盛。
耐盐性强，在含7.5~15%培养基中能生长。
③高盐甘露醇（Chapman）平板：耐盐可生长，金黄色葡萄球菌分解甘露醇产酸，使酚红变为黄色，因而菌落周围形成黄色；
B-P平板：圆形，光滑凸起、湿润、XXXXX2-3mm，呈灰色至黑色，边缘色淡周围为浑浊带，在其外层有一透明带。 (氯化锂抑制革兰氏阴性菌生长，亚碲酸钾抑制除金黄色葡萄球外的革兰氏阳性菌生长。卵黄提供营养和有利于观察卵磷脂环。卵磷脂酶阳性的金黄色葡萄球菌分解亚碲酸钾形成炓色菌落，并分解卵磷脂形成一个透明环。)
血平板：菌落一般呈金黄色，有时为白色，周围有明显的β型溶血环
④触酶试验阳性（与链球菌属、肠球菌属相区别）、凝固酶试验阳性（致病性指标）、致病菌株发酵甘露醇产酸、耐热DNA酶阳性、甘露醇发酵试验阳性（区别于凝固酶阳性的中间葡萄球菌等）
⑤抗原结构a.葡萄球菌A蛋白- (SPA)，SPA可与人类IgG1、IgG2和IgG4的Fc段发生非特异性结合,亦能同豚鼠、小鼠等多种哺乳动物IgG的Fc段某某b.荚膜c.多糖抗原
⑥致病性：酶类和毒素
◎致病性葡萄球菌产溶血毒素(外毒素) ◎金葡噬菌体Ⅲ型——食物中毒（耐热的肠毒素）
⑦耐药性：MRSA——耐甲氧XX金黄色葡萄球菌，唯对万古霉素敏感
32.链球菌属： 无芽孢、无鞭毛、多数无荚膜
①血平板：灰白色、光滑、边缘整齐的菌落，可形成α-，β-，γ-溶血。β型致病力强 。 血清肉汤培养基：易形成长链，试管底部出现絮状沉淀。
②抗原结构：a.核蛋白抗原即P抗原，无特异性；b.多糖抗原即C抗原，群特异性抗原；
c.蛋白质抗原即表面抗原，型特异性
③致病性：A群链球菌也称化脓性或溶血性链球菌，有M、T、R、S四种表面抗原，致病性为M抗原(主要毒力因子，可诱发超敏反应)，是人类细菌性感染常见病原菌之一。
◎杆菌肽敏感试验可作为A群的筛选试验。CAMP试验可作为（B群）无乳链球菌的筛选鉴定试验。Optochin试验，抑菌环直径>14mm 敏感；
1)细胞壁——脂磷壁酸LTA，与M蛋白构成A族菌毛 2)外毒素 3)侵袭性酶，决定了链球菌所致化脓性感染表现为易某某、脓液稀薄、呈灰白色并混有血丝。
④耐药性：大多数链球菌55℃可被杀灭，对常用消毒剂敏感。β-溶血性链球菌对青霉素、红霉素、磺胺药都很敏感；特别对青霉素，极少有耐药菌株。
⑤触酶阴性(G+球菌，还有肠球菌属、乳球菌属等)、6.5%NaCl肉汤不生长，大多不被胆汁溶解，葡萄糖+
⑥非β-溶血性链球菌的鉴定：血清学抗原群测定法可以鉴别B群链球菌、肺炎链球菌和其他草绿色链球菌。草绿色链球菌不存在B、D群抗原，触酶阴性、6.5%NaCl肉汤生长阴性、吡咯烷酮酶阴性、亮氨酸氨基肽酶阳性、10℃和45℃生长阴性；除肺炎链球菌外，其他均为Optochin和胆汁溶菌阴性；除牛链球菌外其他均为胆汁-七叶苷阴性。
——肺炎链球菌：①无芽孢，无鞭毛，营养要求较高，含血液或血清的培养基中生长。 兼性厌氧，5-10% C02生长最好。②血平板上形成细小肚脐状菌落，菌落周围有草绿色溶血环（α溶血）。③触酶试验阴性可分解菊糖，产酸不产气。胆汁溶解试验阳性，Optochin （奥普托欣）敏感试验：阳性。 ＊＊④α－溶血链球菌鉴定（与草绿色链球菌鉴别）（1）Optochin试验：含5μｇOptochin纸片贴于涂布有待测菌的平板上,35℃孵育过夜，抑菌圈大于14mm即为敏感。肺炎链球菌敏感。（2) 胆汁溶菌试验：将0.5ml的0.5号麦氏浓度细菌悬液和等量的2％去氧胆盐置于试管内，35℃孵育2小时后, 菌液变清为阳性。肺炎链球菌为阳性。(3) 胆汁七叶苷试验：将待测菌落接种于胆汁七叶苷斜面，35℃孵育48小时，斜面黑色为阳性。牛链球菌试验阳性。
33.肠球菌属：①呈单个，成对或短链状排列，呈球杆状；液体培养基中呈卵圆形、链状排列。无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。抗原成分：含链球菌D群抗原。
②所有菌株在含6.5%NaCl肉汤中能生长，在40%胆汁培养基中能分解七叶苷。
③触酶阴性、胆汁七叶苷试验阳性（与D群链球菌相同）、PYR阳性、6.5% NaCl肉汤中能生长（区别于链球菌属） ——定属
④致病因素：表面黏附素、炎症调节因子 、毒性分泌物。
九 革兰阴性球菌
34.脑膜炎奈瑟菌：①淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌对人致病②G-，肾形成双排列，在患者脑脊液标本中位于中性粒细胞内，无芽胞、无鞭毛，具有荚膜、菌毛。
③营养要求高、在血液、血清等培养基中才能生长（巧克力色血琼脂培养基），专性需氧、初次分离需5%~10%C02和高某某，最适温度35℃，40℃不生长
生长特点：血琼脂平板或巧克力琼脂平板上呈光滑、湿润，透明或半透明、直径1~2mm的不溶血、圆形、成兰色菌落在液体培养基中呈轻度或中度混浊生长，无菌膜可产生自溶酶，于某某24-48h后在培养基上发生自溶
④定属：氧化酶试验阳性，触酶阳性 定种：对糖分解能力、常作为菌种间的鉴别依据：
葡+、麦+、乳-、蔗-、果- 与淋球菌区别点：淋球菌仅分解葡萄糖+
不能还原硝酸盐和DNA酶阴性与卡他莫拉菌区别
⑤主要致病物质是菌毛、荚膜、内毒素 所致疾病：流行性脑脊髓膜炎(流脑)
35.淋病奈瑟菌：①G-，球形或肾形，成对排列，有荚膜，无芽胞和鞭毛
营养要求高，30-37℃生长，须在含有血液或血清的培养基上培养，常用选择性的T-M、MTM、ML、NYC、巧克力等培养基进行分离培养。初次分离，需5-10%C02，才能生长发育，无CO2，容易发生自溶。菌落：凸起，光滑、圆形，灰白色，半透明；菌落具有变异性；初次分离，24h菌落小，0.5-1mm，凸起、反光，传代后菌落增大、扁平、不反光。
②氧化酶试验：阳性 ；触酶试验：阳性（30%过氧化氢）； CTA-糖分解试验：只分解葡萄糖，不分解麦芽糖等其它糖； 生长特性试验：不生长
③致病物质：菌毛、IgA蛋白酶、内毒素
所致疾病：性接触一一引起淋病 ；产道感染一一引起新生儿淋病性眼结膜炎
十 革兰阳性杆菌
36.炭疽芽孢杆菌：①炭疽是人畜共患病，由于疫苗接种和卫生条件改善，发病率明显下降。②形态特征：本菌为致病性细菌中最大的G+杆菌。两端平截，无鞭毛，呈竹节状排列，芽胞位于菌体中央，有毒菌株有荚膜。
③营养要求不高，需氧或兼性厌氧，生长条件不严格，最适温度30～35℃
a.普通培养基上形成扁平、粗糙、不透明、灰白色、无XX，边缘不整齐的粗糙型（R)菌落，低倍镜下菌落边缘呈卷发状
b.BAP:12～15h不溶血，18~24h轻微溶血，其他需氧芽胞杆菌大多溶血明显而快速
c.戊烷眯多粘菌素B血琼脂平板：（戊烷眯杀灭利什曼原虫等寄生虫，多粘菌素抑制革兰阴性菌生长）
d.有毒菌株在碳酸氢钠血琼脂平板上，5%C0218-24h可产生荚膜，从粗糙型(R)为粘液型（M），用接种针挑取时某某粘丝状。可区分有毒和无毒菌株。
④氧化酶试验、触酶试验阳性；动力阴性；能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。能水解淀粉。不发酵乳糖等其他糖类。能还原硝酸盐为亚硝酸盐。VP试验阳性。不产生吲哚和硫化氢，不利用枸橼酸盐和分解尿素。（生化试验大多为阴性)能分解淀粉，在牛乳中生长2-4天牛乳凝固后缓慢胨化。
1)细菌性抗原：a.菌体多糖抗原 是多种植物凝集素的受体，因而炭疽杆菌的繁殖体和芽孢能与植物凝集素发生凝集反应，可用于鉴定炭疽杆菌。 b.荚膜多肽抗原：由质粒pXO2编码产生，是炭疽杆菌。c.芽胞抗原：具有免疫原性和血清学诊断价值。
2)外毒素抗原 炭疽毒素由保护性抗原（PA）、致死因子（LF）和水肿因子（EF）三种蛋白质形成的外毒素复合物，后两者单独不能发挥生物活性作用，都必须与PA组合引起水肿致死。
⑤致病物质：荚膜、炭疽毒素；所致疾病：皮肤炭疽、肺炭疽、肠炭疽，可并发败血症和脑膜炎 ◎死于败血症的动物严禁宰杀和解剖
37.蜡样芽胞杆菌：①G+大杆菌，有鞭毛、无荚膜，生长6h后即形成圆形芽胞、位于菌体中心或次末端、不突出菌体菌体两端平截，多数呈短链状排列
②营养要求不高，需氧或兼性厌，最适温度30~35℃
a.普通琼脂平板：菌落较大，直径为4mm~10mm，灰白色，表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有蜡样XX b.BAP一有β溶血 c.卵XX板一生长迅速，培养3h后，虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷脂而形成白色的混浊环，称乳光反应或卵黄反应
③氧化酶、触酶试验阳性，动力试验阳性，能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、水杨素、糊精，产酸不产气 ；能胨化牛乳，液化明胶，VP（+）、卵磷脂酶（+）
多次传代后生化特性常可改变
④甘露醇卵黄多粘菌素平板MYP(固体平板计数)
活菌计数——例如：样品稀释度10-4平板上的平均菌落数为150个，取5个菌落分纯进行证实试验，结果4个菌落为阳性，则菌落计数结果为：150×0.8×10×104=1.2×107cfu/ml(g)
⑤蜡样芽孢杆菌与类似菌的鉴别试验：a.动力试验用接种针挑取培养物穿刺接种于动力培养基中，30~32℃培养24h。区别于炭疽芽孢杆菌和覃状芽孢杆菌
b.卵黄反应和溶血可区别巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌
c.蛋白质毒素结晶染色区别于苏云金芽孢杆菌
38.肉毒梭菌 肉毒毒素、分型、特点、毒素检测
39.白喉棒状杆菌 异染颗粒、选择培养基、菌落、白喉毒素、
40.埃希菌属 选择培养基、菌落、定属定种鉴别、肠道感染EI、T、H、PEC、标本程序
41.变形杆菌属 选择、菌落、定属、定种、鉴别、标本、程序、鉴定要点、同源形检测
42.志贺菌属 选择菌落、定属定种鉴别、抗原结构与分群分型、标本、程序、鉴定要点
沙门菌属 许多人畜共患病
①（一）形态特征：革兰氏染色阴性，短小杆菌，无荚膜，无芽胞，多数有鞭毛，动力阳性。
（二）培养特征 a.需氧或兼性厌氧，最适温度37℃，PH7.2～7.4。
b.在普通培养基生长良好，在选择性平板上37℃，24h,能形成不分解乳糖的菌落，表面光滑湿润，无色半透明，边缘整齐的菌落，可产生H2S，在强选择性培养基SS、HE、XLD上形成黑色中心的菌落。
②a.发酵葡萄糖，甘露醇，山梨醇产酸产气（伤寒沙门菌、鸡伤寒沙门氏菌不产气）
b.不发酵乳糖，蔗糖，水杨苷等 c.多数产生H2S（+），不产靛基质（-），不分解尿素（-），
d.苯丙氨酸脱氨酸(－)、ONPG(－)
定属：氧化酶阴性、O/FF KIA(KA+十)、(KA-+)(KA+-） MIU(+--) IMViC (-+--)
定种：葡萄糖+、乳糖－、产酸，多数产气H2S，吲哚+、尿素酶－
鉴别：典型沙门氏菌在三糖铁培养上的特征：表面（-）粉红色、底层（+）黄色、H2S（+）底层有黑色、有动力。
在TSI培养基中表面（+）黄色的培养物可排除 其它培养物均有可能是沙门氏菌。
③抗原结构：(1)菌体抗原O 分群依据，由数个成分组成，将具有共同0抗原的沙
门菌归为一个群；耐热；刺激机体产生lgM；临床分离沙门菌95%属A-F群。
(2)鞭毛抗原H 成分为蛋白质；是分型依据；分第1相和第2相(第1相特异性高）；刺激机体产生IgG (3)表面抗原：Vi、M、5抗原、Vi抗原 伤寒、希氏沙门菌的表面抗原，酸性多糖聚合体，不耐热，60℃30'，100℃5'可破坏。
④致病性：侵袭力(侵袭素和vi抗原)和毒素(内毒素和外毒素〔肠毒素〕)
致病：伤寒副伤寒——肠热症；败血症；胃肠炎(食物中毒)；无症状带菌者
⑤细菌学检验标本：
1.患者标本：血液、粪便、尿液、骨髓；其它标本血清（急性期、恢复期)
2.食物中毒标本：粪便、呕吐物、可疑食物等3.带菌者标本：肛拭子、血清（Vi抗体检测）
程序、鉴定要点。
◎食品中毒检验的关键步骤：增菌的目的：使待检菌复壮，抑制杂菌生长，提高检出率。
◎选择性增菌：增菌液一般用TTB和SC两种。促进沙门菌持续增殖，同时抑制杂菌生长。
◎鉴定依据：革兰阴性杆菌，XLD上形成红色菌落，有/无黑色中心，BS上形成具有金属XX的棕色到黑色菌落，MAC上形成无色半透明菌落氧化酶阴性，TSIA-++/-+MIU+--赖氨酸脱羧酶+，KCN -，符合沙门菌属生化特征，沙门菌诊断血清凝集
耶尔森菌：小肠结肠炎耶尔森菌
①G-球杆菌，偶有两极浓染，无芽胞荚膜，35℃无动力，22-25℃有动力。
培养特性：兼性厌氧，耐低温，在4C~50℃均能生长，最适温度为20℃~28℃。(培养用26±1℃），37℃生长不良。在普通琼脂上生长良好。MAC、SS上生长缓慢，菌落小，无色半透明、扁平、光滑、为不发酵乳糖的菌落.
选择培养基：CIN-1——深红色中心，周围具有无色透明圈
改良Y培养基(NYE新耶尔森菌选择琼脂)——无色半透明、扁平、光滑、不发酵乳酸的菌落
②改良克氏双糖铁琼脂，26℃±1℃培养24h，分解山梨醇、葡萄糖斜面和底部皆变黄、不产
气，硫化氢阴性，脲酶阳性，动力试验和VP试验22℃-25℃阳性：35℃-37℃阴性，鸟氨酸脱羧酶阳性。(定属、定种、鉴别)
致病：小肠结肠炎、食物中毒
③细菌学检查：a.标本采集患者粪便血液可疑食物肉及制品、乳制品、蛋制品等
b.冷某某——分离培养——生化鉴定——血清学鉴定
c.结果报告：革兰氏阴性球杆菌，CIN-1平板上形成深红色中心,周围具有无色透明圈(红色牛眼状菌落),改良KIA上下黄色，不产气、H2S阴性尿素酶阳性，VP、动力25 ℃ 阳性、37 ℃ 阴性，鸟氨酸脱羧酶阳性、其它符合小肠结肠炎耶尔森菌生化结果。
霍乱弧菌
①可呈头尾相接的“鱼群”样排列，菌体一端有鞭毛，悬滴观察时某某“穿梭”样运动，有普通菌毛和性菌毛，O139群有荚膜
②营养要求不高，在普通琼脂上生长良好。兼性厌氧，37℃为适宜。具耐碱性，初次分离常某某pH9.2的碱性胨水进行选择性增菌培养，经35℃6h～9h增菌后可在液体表面形成菌膜常用的选择性培养基为硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板(TCBS)。发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色。霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还原成原子态的碲，形成有灰褐色中心的菌落。
③氧化酶阳性，对弧菌制动剂O/129敏感，粘丝试验阳性吲哚试验阳性、硝酸盐还原试验阳性（霍乱红试验阳性）动力阳性发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇，迟缓发酵乳糖赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性。(定属 定种 鉴别)
④抗原结构与分群：O抗原的不同，现有155个（200）血清群，O1群、O139群引起霍乱，O2群~O138群----血清群可引起人类的胃肠炎，不引起霍乱流行，称之为非O1群霍乱弧菌。以往也称不凝集弧菌或非霍乱弧菌
⑤霍乱——人类是唯一易感者
⑥鉴别试验 霍乱弧菌与拟态弧菌鉴别：蔗糖发酵（＋)(－）霍乱弧菌和气单胞菌和邻单胞菌鉴别：黏丝试验（＋）（－） 流行病学意义、标本、程序、鉴定要点
副溶血性弧菌 ①革兰阴性直或微弯杆菌，极端单某某，无荚膜
②营养要求不高，嗜盐（无盐不生长,最适盐浓度3.5%）最适pH7.7～8.0，最适温度30～37℃TCBS上形成绿色菌落；在SS平板上形成扁平，无色半透明，蜡滴状的菌落，不易刮下，有辛辣味。 ——神奈川现象：从腹泻患者中分离到的副溶血弧菌95%以上在我妻培养基（7%NaCl-甘露醇-人血培养基）上可产生β-溶血现象。
③氧化酶+ 、葡萄糖 +、乳糖、蔗糖－、甲基红+ 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 ，---空肠/大肠弯曲菌最适生长温度42℃ ---胎儿弯曲菌于25℃和37℃均可生长营养要求高：常用布氏肉体增菌，布氏血平板培养。③灰白色扁平湿润边缘不整齐蔓延生长的菌落（迁徙生长）无色半透明圆形凸起有XX的小菌落④不能利用糖类，以氨基酸为能量来源。氧化酶和触酶阳性，硝酸盐还原（+）尿素（-）、硫化氢（-）。⑤致病：细菌性腹泻、食物中毒 ——空肠弯曲菌主要引起肠道感染；胎儿弯曲菌主要引起肠外感染。
螺杆菌属：①幽门螺杆菌HP感染与慢性浅表性胃炎或萎缩性胃炎有关。胃癌发病率在一些Hp感染率高的人群中较高。②革兰染色阴性。菌体细长弯曲呈螺形、S形或海鸥形。固体培养基上生长时，除典型形态外，有时可出现杆状或圆球状。菌体一端或两端可有多根带鞘鞭毛，运动活泼。③微需氧： 5%O2、10%CO2、85%N2，最适生长温度：35~37℃ 高某某环境：湿度大于98%，营养要求高，特殊血平板生长（Skirrow血琼脂）3-5天形成可疑菌落(无色半透明、圆形、“露滴样”小菌落，轻度溶血扁平、融合成片，沿穿刺线扩散生长)
④不活跃，不能利用糖类、马尿酸水解（-）脲酶强（+）、氧化酶和触酶（+）。
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