如何制备流式样本
以下为《如何制备流式样本》的无排版文字预览，完整内容请下载
很多时候碰到做流式的老师都在问一个问题，到底为啥我的实验结果不好看？大部分情况下去追本溯源，最后都会发现是一开始样本制备上或多或少出现了一些问题。流式的样本制备在我们一些老flower的眼里是一个“一力降十会”的过程，如果你的样本制备好了，后续上机再怎么粗糙，实验结果也不会差到哪里去，而如果我们的样本制备的不好，往往后续再怎么调整分析，也很难得到理想的实验结果。
?
? ? ? 本期开始我会跟大家仔细聊聊流式样本制备的一些流程和注意要点，试图帮助大家少走弯路，更好的获得高质量的流式样本。
?
? ? ? 首先我们先讲血液/骨髓/脾脏的制备，血液/骨髓/脾脏的样本特点是：成分相对简单，大部分都是免疫细胞。细胞间质少，组织细胞少，所以制备起来相对也比较简单，原则上我们将上述样本中的红细胞去除掉以后，大部分剩余细胞都是单纯的免疫细胞亚群了。
一、样本的采集：
血液/骨髓的采集：?
? ? ? 血液和骨髓的样本都是比较理想的液体样本，我们的采集一般都会使用到采血管，能够满足后续流式实验的采血管一般来说有2种最为常见，即肝素钠抗凝的绿头采血管，以及edta抗凝的紫头采血管。
?/
? ? ? 大部分的流式实验2种采血管都是可以任意选择的。但是在一些特殊实验中，我们是不能使用edta抗凝的紫色采血管的，比如细胞凋亡实验，以及需要对细胞进行刺激的分泌型细胞因子（例如IFN,IL-4等）的检测实验，这些实验都需要细胞表面有比较大的钙离子丰度，如果使用edta抗凝管会洗脱掉钙离子从而让实验结果变得不可控。
//
? ? ? 当样本采集进采血管后我们可以就地放于常温或者4度避光保存，有文献报道说采血管中的样本在24h内置于常温保存的效果会更好于4度，这点大家也可以参考，但是对于需要长途运输超过24h的样本还是推荐大家对样本进行一定的降温，这样有助于长时间的样本稳定性。
?
脾脏单细胞的采集：
? ? ? 脾脏也是我们常见的流式研究对象样本之一，脾脏本身是生物体最大的储血器官，其内部大部分成分其实也是血液，我们在摘取脾脏后只需要对脾脏进行碾磨就可以轻易的获取脾脏中的血细胞了，当然需要大家注意的是碾磨本身需要柔和，以及碾磨后要及时的过滤以获得比较好的单细胞悬液。
这里给大家一个我常做的脾脏处理的步骤作为参考：
1.?将脾脏组织转移到35mm无菌培养皿中。后续如需进行细胞分选，在培养皿中加入5mL1640基础培养基。如解离组织后不需细胞分选，请在培养皿中加入含1mMEDTA的PBS。
2.?去除脾脏组织上的结缔组织或脂肪，注意坏死区域，并检查脾脏是否有肿大、变色或病变。记录起始样本的状态对于后期评估细胞非常重要。
3.?从5ml无菌注射器中取出活塞/柱塞。使用扁平的末端部分以温和画圆的方式研磨脾脏，碾磨至无明显红色结团为止，这样可以破坏脾脏和髓质，释放脾细胞。
4.?将一个70μm细胞过滤器置于15或50mL无菌锥形管上，并用2ml推荐培养基润洗滤网。注意：细胞可能会黏附于干燥的滤网上，润洗滤网可以减少这种情况。
5.?使用润洗过的5或10mL移液管或移液枪将脾细胞吹打均匀。
6.?将培养皿中的物质全部转移至润洗过的70μm细胞过滤器中。使用注射器的活塞/柱塞。使用扁平的末端部分以温和画圆的方式在滤网里继续轻柔碾磨，从而使细胞和组织通过滤网。用3mL推荐培养基冲洗滤网，继续碾磨通过。
7.?将收集到离心管里的脾脏细胞平衡后放置于离心机离心，转速为250g-300g，离心时间6min。
8.?取出离心管，倒去上清，轻轻敲击试管重悬细胞。
二、样本的单细胞制 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 胞活性，如果无法保证，则需要加入死活细胞染料来进行死细胞的排除。
///
细胞的抗体染色特异性：
? ? ? 要知道抗体的结合除了特异结合外，往往还存在着和细胞表面的fcr的非特异性结合，所以我们最好能够在染色前孵育一遍FC受体阻断剂，以提高染色结果的准确性。
?
? ? ? 当我们注重了样本采集，单细胞制备和样本质控后，我们的实验结果会变得更好，更有利我们得到理想的流式结果。当然，除了我们常见的血液/脾脏/骨髓样本外，很多老师也在深入研究组织中的免疫微环境，这就不免会涉及到肿瘤，组织中的免疫细胞的获取，下期罗工秘笈我会深入的和大家交流如何有效的获取组织中的免疫细胞，希望对大家有所帮助：）
[文章尾部最后300字内容到此结束,中间部分内容请查看底下的图片预览]请点击下方选择您需要的文档下载。
- 细胞中的糖类和脂质 教案
- 人教版生物必修二第二章基因和染色体的关系练习
- 细胞通过分裂产生新细胞教学设计
- 医学统计学概念
- 生物复习练习题1(1)
- 1月学考生物试题（红色部分表示与选考一下）
- 提案的格式及样本
- 《3.3 细胞核—系统的控制中心》教学设计
- 内皮细胞感染以及新冠病毒所导致的内皮炎
- 翻转课堂4组味觉知识点
以上为《如何制备流式样本》的无排版文字预览，完整内容请下载
如何制备流式样本由用户“icytizzy”分享发布，转载请注明出处