3 细菌性腹泻中11种致病菌的快速检测 多重PCR方法
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ICS?01.040.11
C 62?
?????
团体标准
T/JPMA XXX—2019
细菌性腹泻中11种致病菌的快速检测
多重PCR方法
Multiplex PCR assay for the detection of 11 pathogenic bacteria in bacterial
diarrheal diseases
2019 - XX- XX发布
2019 - XX - XX实施
?????**_*???发布
前??言
本标准按照 GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由*_**提出。
本标准由**_*归口。
本标准起草单位：*_**、*_**、**_*。
本标准主要起草人：丁某某、张平、朱某某、杜某某、唐某某、曾滨、谢某某、江某某、叶某某、石某某、王燕、白某某、王炜。 细菌性腹泻中11种致病菌的快速检测 多重PCR方法
范围
本标准规定了O1群霍乱弧菌、O139群霍乱弧菌、沙门菌、志贺菌、致病性小肠结肠炎耶尔森菌、副溶血弧菌、致泻大肠埃希氏菌的5种类型（EPEC、ETEC、EIEC、O157：H7血清型EHEC和EAEC）共11种致病菌的多重PCR检测方法。
本标准适用于粪便样本中O1群霍乱弧菌、O139群霍乱弧菌、沙门菌、志贺菌、致病性小肠结肠炎耶尔森菌、副溶血弧菌、致泻大肠埃希氏菌的5种类型（EPEC、ETEC、EIEC、O157：H7血清型EHEC和EAEC）共11种致病菌的快速检验。
规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
GB 19489 实验室生物安全通用要求
缩略语
下列缩略语适用于本文件。
EPEC 肠道致病性大肠埃希氏菌 (Enteropathogenic Escherichia coli)
EIEC 肠道侵袭性大肠埃希氏菌 (Enteroinvasive Escherichia coli)
ETEC 产肠毒素大肠埃希氏菌 (Enterotoxigenic Escherichia coli)
EHEC 肠道出血性大肠埃希氏菌 (Enterohemorrhagic Escherichia coli)
EAEC 肠道集聚性大肠埃希氏菌 (Enteroaggregative Escherichia coli)
eae 紧密素基因 (gene encoding intimin for Escherichia coli attaching and effacing)
elt 热不稳定性肠毒素基因 (heat-labile enterotoxin)
est 热稳定性肠毒素基因 (heat-stable enterotoxin)
ipaH 侵袭性质粒抗原H 基因 (invasive plasmid antigen H-gene)
rfb O抗原合成基因簇
aggR 集聚黏附菌毛调节基因 (aggregative adhesive fimbriae regulator)
virA 毒力调控基因
hlyA 溶血素基因 (hemolysin A)
ctxB 霍乱毒素B亚单位基因 (Cholera?toxin?B?subunit)
invA 侵袭蛋白A基因 (invasion?protein A)
t 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 e阳性或阴性；malK阳性。
EAEC
aggR，malK
aggR和malK阳性。
a 部分志贺菌株malK阳性，与EIEC难以区分，需用生化试验进一步鉴定。
序列测定
必要时，可取待测样本扩增出的PCR产物进行序列测定，序列结果与公开发表的相应靶标片段进行比对，序列同源性在90%以上，可确认待测样本中相应的靶基因核酸片段阳性，否则判为阴性。
（资料性附录） 多重PCR 扩增实例参照
A组9个靶标基因多重PCR扩增阳性的毛细管电泳图
B组7个靶标基因多重PCR扩增阳性的毛细管电泳图
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