免疫组化原件
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免疫组化染色
1.石蜡切片于50~60°C烘箱20min（一般58°C，烘箱温度不超过60°C）；
2.二甲苯（Xylol）洗腊三次，5min/次，（每次置换干净的Xylol脱蜡）；
3.99%酒精洗一下（各2min）：99%酒精→96%酒精→70%酒精→50%酒精→30%酒精
4.自来水清洗3次（2min/次），漫于PBS中（从此步骤开始都要保持湿润，也可用TBS（TBST不加吐温），TBS洗背景较好）；
⑤冰冻切片室温化片5min，-20°C丙酮10min；
⑥TBS洗3次
5.60mL双蒸水+600uL100x柠檬酸钠（Vector：Citrate-based solution H-3300 pH6.0或Tris-based solution H-330 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 00）
13.PBS洗三次；
14.二抗常温孵育30min；（二抗稀释：1：200）
15.PBS洗三次；
16.DAB显色（避光），（5mL水+2滴buffer+4滴DAB→混匀后加2滴双氢水）（30~60s后）把切片放入PBS终止显色
17.（染核）苏木素hematoxylin（Gill’s Formula）染色30-60s；
18.自来水洗3次；
19.0.3%HCl+70%酒精（3mLHCl+1L70%酒精）洗3-5下；
20.自来水洗3次；
21.0.1%氨水（1mL氨水+1L双蒸水）洗3-5下；
22.自来水洗3次；
23.96%酒精20s→99%酒精2min；
24.Xylol清洗3次，每次2min（每次置换干净的Xylol清洗）；
25.封某某。
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