3种临床消毒剂杀菌效果和皮肤刺激性的比较研究_XX俊

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第 39 卷第 9 期 2018 年 9 月安徽医学 Anhui Medical Journal 3 种临床消毒剂杀菌效果和皮肤刺激性的比较研究 XX俊蔡标童琳李舜戴陈某某王超周某某 1029 ·基础医学· ［摘要］目的比较 3 种临床消毒剂杀菌效果和皮肤刺激性。方法按照消毒技术规范要求，采用中和剂鉴定实验、悬液定量杀菌实验和动物毒理学实验方法，分别对乙醇、碘伏、三氯生对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和铜绿假单某某杀灭效果及其皮肤刺激性进行实验室研究。结果细菌繁殖体中和剂鉴定实验和真菌中和剂鉴定实验中，第 3、4、5 组组间菌落数误差率分别为 6． 40 % 、4． 00 % 、5． 23 % 和 12． 90 % 、8． 61 % 、8． 31 % ，均符合要求，所选中和剂及其浓度为受试样品杀菌实验适宜的中和剂。作用 0． 5、1 min 时，三氯生对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌杀灭效果最佳，平均杀灭对数值分别为（ 6． 65 ± 0． 05）、（ 7． 56 ± 0． 03）和（ 6． 62 ± 0． 09）、（ 7． 51 ± 0． 08），且同一时间点 3 种消毒剂杀灭效果差异有统计某某义（ P ＜ 0． 05）；作用 0． 5、1、1． 5 min 时，乙醇对铜绿假单某某、白色念珠菌杀灭效果最佳，平均杀灭对数值分别为（ 6． 65 ± 0． 06）、（ 7． 02 ± 0． 04）、（ 8． 02 ± 0． 02）和（ 6． 36 ± 0． 04）、（ 7． 62 ± 0． 10）、（ 8． 17 ± 0． 02），且同一时间点 3 种消毒剂杀灭效果差异有统计某某义（ P ＜ 0． 05）。3 种临床消毒剂多次皮肤刺激性指数为 0，刺激反应强度均为无刺激性。结论 3 种临床用消毒剂均对豚鼠皮肤无刺激。三氯生对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌杀灭效果最好，乙醇对铜绿假单某某和白色念珠菌的杀菌效果最优。［关键词］临床；消毒剂；杀菌效果；刺激性 doi： 10. 3969 / j. issn. 1000 － 0399. 2018. 09. 001 Comparative study on germicidal efficacy and skinirritation of three kinds of clinical disinfectants WU Changjun，CAI Biao，TONG Lin，et al Anhui Academy ofMedical Sciences，Hefei 230061，China ［Abstract］ Objective To compare the bactericidal efficacy and skinirritationof three kinds of clinical disinfectants． Methods According to technical specification for disinfection，neutralization agent identification experiment，suspension quantitative germicidal test and animal toxicity test were used to observe the germicidal efficacy and irritation of ethanol，iodophorand triclosan on Escherichia coli，Staphylococcus aureus，Candida albicans and Pseudomonas aeruginosa． Results The error rate of colony numbers of neutralizer identification experiments between groups 3，4，5 was respectively 6． 40 % ，4． 00 % ，5． 23 % and 12． 90 % ，8． 61 % ，8． 31 % ，all conformed to the requirements． The selected neutralizer and its concentration were suitable for the germicidal test of samples． Triclosan had the best killing effect on Staphylococcus aureus and Escherichia coli after acting at 0． 5 min and 1 min，the average killing log valuewas respectively（ 6． 65 ± 0． 05），（ 7． 56 ± 0． 03） and（ 6． 62 ± 0． 09），（ 7． 51 ± 0． 08），and thegermicidal efficacy of three kinds of disinfectants had significant difference at the same time（ P ＜ 0． 05）； ethanol had the best killing effect on Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans after acting at 0． 5 min，1 min and 1． 5 min； the average killing log value was respectively（ 6． 65 ± 0． 06），（ 7． 02 ± 0． 04），（ 8． 02 ± 0． 02） and（ 6． 36 ± 0． 04），（ 7． 62 ± 0． 10），（ 8． 17 ± 0． 02）． The germicidal efficacy of three kinds of disinfectants had significant difference at the same time（ P ＜ 0． 05）． The irritation index of skin was measured to be 0 and the irritation stimulus intensity was non － irritating of these three kinds of clinical disinfectants． Conclusion The three kinds of clinical disinfectants are safe and non － irritating to skin of guinea pigs． Triclosan hasthe best killing efficacy on Escherichia coli and Staphylococcus aureus． Ethanol hasthe best killing efficacy on Candida albicans and Pseudomonas aeruginosa．［Key words］ Clinical； Disinfectants； Germicidal efficacy； Irritation 目前，医院常见的致病菌为金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌以及铜绿假单某某等。金黄色葡萄球菌属革兰氏阳性菌，能引起组织器官脓肿和手术创伤化脓［1］。大肠杆菌为革兰氏阴性菌，能导致急性胃基金项目： XX省“十三五”医疗卫生重点专科建设项目（项目编号：皖卫科教［2017］30 号）作者单位： 230061 XX XX省医学科学研究院通信作者：蔡某某，Caib81@ 163． com 1030 XX俊等： 3 种临床消毒剂杀菌效果和皮肤刺激性的比较研究第 39 卷第 9 期 2018 年 9 月肠炎和腹泻症状的发生［2］。白色念珠菌属真菌类，通过感染人体和在人体内增殖，形成侵袭性真菌感染，导致患者严重感染甚至死亡［3］。铜绿假单某某属革兰某某性菌，是一种条件致病菌，能引起皮肤、软组织和呼吸道感染，以及菌血症等疾病［4］。而医院消毒灭菌工作是提高医疗护理质量的前提和保障，是预防院内感染的重要手段之一［5］。目前，消毒剂已被广泛应用于医院的常规消毒灭菌工作中［6］。消毒剂是指能够杀灭或抑制传播媒介中的病原微生物的制剂，能够切断传染病的传播途径，达到控制传染病的目的［7］。目前，医院医用消毒剂有多种，但作用原理和杀菌效果大不相同。随着消毒剂的频繁使用，抗药菌株不断出现，需要定期评价不同消毒剂的消毒效果。本研究比较临床上常用 3 种消毒剂的杀菌效果和皮肤刺激性，并进行相关实验研究，现将结果报道如下。 1 材料与方法 1． 1 实验材料 1． 1． 1 实验用消毒剂含乙醇 75． 4 % 的无色透明液体，pH 值为 6． 5；含有效碘 0． 51 % 的棕色液体，pH 值为 2． 8；含三氯生 0． 18 % 的无色透明液体，pH 值为 7． 4。 1． 1． 2 实验菌株大肠杆菌（ ATCC 8099）、金黄色葡萄球菌（ ATCC 6538）、白色念珠菌（ ATCC 10231 ）、铜绿假单某某（ ATCC 15442）购自安徽艾浮地艾空气净化检测站，来源于中国普通微生物菌种保藏管理中心。 1． 1． 3 实验动物多次皮肤刺激实验选用健康豚鼠 18 只，体质量为 250 ～ 300 g，随机分为 3 组，每种消毒剂选用 1 组进行实验。动物来源： XX安立默科技有限公司，动物合格证号： NO． ***。动物饲养环境为室温 18 ～ 28 ℃ ，相对湿度为 40 % ～ 70 % 。 1． 1． 4 培养基营养琼脂培养基（用于培养金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单某某）、沙氏培养基（用于培养白色念珠菌），均购自北京陆桥技术股份有限公司。 1． 1． 5 中和剂细菌杀灭实验选用中和剂为 1 % （ W / V）卵磷脂 + 1 % （ W / V）吐温 80 的 0． 03 mol / L 磷酸缓冲盐溶液（ phosphate buffer saline，PBS）（乙醇）；含 1 % （ W /V）硫代硫酸钠 + 1 % （ W /V）卵磷脂 + 1 % （ W / V）吐温 80 的 0． 03 mol / L PBS 溶液（碘伏）；含 0． 3 % （ W / V）硫代硫酸钠 + 2 % （ W / V）吐温 80 + 0． 5 % （ W / V）卵磷脂的 0． 03 mol / L PBS 溶液（三氯生）。有机干扰物为 30 g / L 牛血清白蛋白。 1． 2 供试菌株的活化接种供试菌株大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和铜绿假单某某至相应的琼脂试管斜面培养基上，置生化培养箱中 37 ℃ 需氧培养 24 h。每个菌种各取 2 支斜面供实验用，其余冷藏备用。 1． 3 菌悬液的制备分别挑取大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌和铜绿假单某某斜面菌落接种至相应的琼脂平板，置生化培养箱中 37 ℃ 需氧培养 24 h 至对数生长期，无菌生理盐水洗脱菌落，分别制成菌液浓度为 107 ～ 108 cfu / mL 的菌悬液，备用。 1． 4 中和剂鉴定实验实验选择金黄色葡萄球菌（细菌）和白色念珠菌（真菌）进行中和剂鉴定实验［8］。实验分为 6 组：第 1 组为消毒剂 + 菌悬液，第 2 组为（消毒剂 + 菌悬液） + 中和剂，第 3 组为中和剂 + 菌悬液，第 4 组为（消毒剂 + 中和剂） + 菌悬液，第 5 组为稀释液 + 菌悬液，第 6 组为稀释液 + 培养基 + 中和剂。具体实验步骤按《消毒技术规范》卫生部 2002 版中悬液定量杀菌实验程序［8］进行。第 6 组平板菌落数应为 0；第 1 组平板菌落数应为 0，或仅有极少；第 2 组平板菌落数应某某 1 组多，但应某某 3、4、5 组少；第 3、4、5 组组间菌落数误差率应≤15 % ，组间菌落数误差率按下式计算。重复实验 3 次，均符合要求时，判定所选中和剂及其浓度为受试样品杀菌实验适宜的中和剂。 1． 5 悬液定量杀菌实验在无菌试管内分别加入 0． 5 mL菌悬液和 0． 5 mL 有机干扰物溶液，再加入受试消毒剂杀菌工作浓度 1． 25 倍的消毒剂（阳性对照为胰蛋白胨生理盐水溶液），快速混匀。分别作用至设定时间，取混合液 0． 5 mL 加至装有 4． 5 mL 中和剂溶液的试管内，混匀作用 10 min，中和杀菌反应。选取稀释液 + 中和剂 + 培养基作为阴性对照，37 ℃ 培养 48 h，实验于 19 ～ 21 ℃ 水浴条件下进行，重复上述所有实验步骤 3 次。观察实验结果，稀释涂平板并计算各组的菌浓度（ cfu / mL），换算成对数值，杀灭对数值［8］按下式计算：平均杀灭对数值 = 阳性对照组平均菌浓度对数值－实验组平均菌浓度对数值。 1． 6 多次皮肤刺激实验取皮肤正常完好的健康白色豚鼠 6 只，实验前 24 h 背脊部两侧各约 3 cm × 3 cm 备皮。将受试消毒液原液均匀涂在一侧脱毛某某，无刺激性塑料膜覆盖表面，无刺激性胶布和绷带加以固定，另一侧脱毛某某无处理，作为阴性对照。4 h 后温水洗净残留消毒剂。每天实验处理 1 次，连续实验 14 d。在每次实验后 24 h 观察皮肤刺激反应并进行评分。评分方法与刺激指数计算方法参照《消毒技术规范》［8］，见表 1、2。第 39 卷第 9 期 2018 年 9 月安徽医学 Anhui Medical Journal 1031 表 1 皮肤刺激反应的评分标准皮肤刺激反应红斑形成无勉强可见明显严重紫红色红斑，并有焦某某水肿形成无勉强可见皮肤隆起，轮廓清楚水肿隆起约 1 mm 水肿隆起超过 1 mm 皮肤刺激反应评分（分） 0 1 2 3 4 0 1 2 3 4 表 2 皮肤刺激强度分级表皮肤刺激评分范围 0 ～＜ 0． 5 分 0． 5 ～＜ 2． 0 分 2． 0 ～＜ 6． 0 分 6． 0 ～ 8． 0 分刺激强度级别无刺激性轻刺激性中等刺激性强刺激性数），并以表 2 判定皮肤刺激强度。每天每只动物平均积分为每只动物 14 d 的红斑和水肿总积分 / （受试动物数 × 天数）。 1． 7 统计学方法应用 SPSS 13． 0 对数据进行统计分析，计量资料以 x ± s 表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，计数资料以率表示，率的比较采用 Fisher 确切概率法，以 P ＜ 0． 05 为差异有统计某某义。 2 结果 2． 1 中和剂鉴定实验结果细菌繁殖体以金黄色葡萄球菌作为实验菌。第 1、6 组平板菌落数为 0；第 2 组平板菌落数比第 1 组多，但比第 3、4、5 组少；第 3、4、5 组组间菌落数误差率分别为 6． 40 % 、4． 00 % 、 5． 23 % ，乙醇第 3、4、5 实验组间菌落数误差率差异无统计某某义（ P = 1． 000）、碘伏第 3、4、5 实验组间菌落数误差率差异无统计某某义（ P = 1． 000）、三氯生第 3、 4、5 实验组间菌落数误差率差异无统计某某义（ P = 1． 000）。见表 3。按下列公式计算每天每只动物平均积分（刺激指表 3 3 种消毒剂中和剂鉴定实验（以金黄色葡萄球菌作为实验菌）生长菌落数结果（ x ± s，cfu / mL）组别 1 2 3 4 5 6 乙醇（ 75． 4 % ） 0 （ 4． 97 ± 0． 31） × 102 （ 2． 57 ± 0． 06） × 107 （ 2． 60 ± 0． 36） × 107 （ 2． 83 ± 0． 31） × 107 0 碘伏（ 0． 51 % ） 0 （ 7． 90 ± 0． 30） × 102 （ 2． 97 ± 0． 57） × 107 （ 2． 93 ± 0． 58） × 107 （ 3． 00 ± 0． 26） × 107 0 三氯生（ 0． 18 % ） 0 （ 8． 97 ± 0． 42） × 102 （ 2． 57 ± 0． 29） × 107 （ 2． 80 ± 0． 20） × 107 （ 2． 87 ± 0． 38） × 107 0 真菌以白色念珠菌作为实验菌。第 1、6 组平板菌率差异无统计某某义（ P = 1． 000）、碘伏第 3、4、5 实验落数为 0；第 2 组平板菌落数比第 1 组多，但比第 3、4、5 组间菌落数误差率差异无统计某某义（ P = 1． 000）、三组少；第 3、4、5 组组间菌落数误差率分别为 12． 90 % 、氯生第 3、4、5 实验组间菌落数误差率差异无统计某某 8． 61 % 、8． 31 % ，乙醇第 3、4、5 实验组间菌落数误差义（ P = 1． 000）。见表 4。表 4 3 种消毒剂中和剂鉴定实验（以白色念珠菌作为实验菌）生长菌落数结果（ x ± s，cfu / mL）组别 1 2 3 4 5 6 乙醇（ 75． 4 % ） 0 （ 2． 53 ± 0． 15） × 102 （ 1． 27 ± 0． 06） × 107 （ 1． 43 ± 0． 05） × 107 （ 1． 77 ± 0． 06） × 107 0 碘伏（ 0． 51 % ） 0 （ 1． 87 ± 0． 21） × 102 （ 1． 73 ± 0． 06） × 107 （ 1． 93 ± 0． 31） × 107 （ 2． 03 ± 0． 15） × 107 0 三氯生（ 0． 18 % ） 0 （ 2． 17 ± 0． 21） × 102 （ 1． 73 ± 0． 21） × 107 （ 1． 83 ± 0． 32） × 107 （ 2． 03 ± 0． 15） × 107 0 2． 2 3 种消毒剂悬液定量杀灭实验结果作用 0． 5、 1 min时，三氯生对金黄色葡萄球菌杀灭效果最佳，作用 1． 5 min 时，乙醇杀灭效果最佳；同一时间点 3 种消毒剂效果差异有统计某某义（ P ＜ 0． 05 ）。作用0． 5、 1 min时，三氯生对大肠杆菌杀灭效果最佳，且 3 种消毒剂杀灭效果差异有统计学意义（ P ＜ 0． 05 ）；作用 1． 5 min时，乙醇杀灭内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。部，2002．［9］徐某某，徐某某，邹某某．消毒乙醇的合理配制［J］．数理医药学杂志，2004，17（ 4）： 370 － 371．［10］迟某某．两种含碘消毒剂对皮肤消毒效果的比较［J］．人人健康，2017，36（ 4）： 277 － 279．［11］罗某某，刘某某，张某某．碘伏对钛合金表面金葡菌细菌生物膜抗菌活性的实验研究［J］．中国矫形外科杂志， 2016，24（ 10）： 926 － 930．［12］林圣光，周兆懿．纺织品中三氯生检测方法研究进展［J］．纺织科技进展，2015，37（ 4）： 71 － 73．［13］张鹏，张维，齐丽娟，等．三氯生的急性毒性、局部毒性及亚慢性经皮毒性试验研究［J］．毒理学杂志，2014，28 （ 5）： 413 － 415．［14］周某某，施某某，吴某某．三氯生和三氯卡班的毒性研究进展［J］．安徽医科大学学报，2017，52（ 1）： 147 － 151．（ 2018 － 02 － 05 收稿） [文章尾部最后500字内容到此结束,中间部分内容请查看底下的图片预览]请点击下方选择您需要的文档下载。

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