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食品中大肠埃希氏菌的检测GB4789.36-2016
一,实验目的:
掌握食品中大肠埃希氏菌的检测原理与鉴定方法
检测某品牌矿泉水中是否存在致病性的大肠埃希氏菌
二,实验原理:
1.大肠杆菌,又叫大肠埃希氏菌是条件致病菌,在一定条件下可以引起人和多种动物发生胃肠道感染或尿道等多种局部组织器官感染。因此,检查食品中是否存在治病大肠埃希氏菌具有实际意义。
2. 在TSI琼脂中,典型菌株为斜面与底层均呈黄色,产气或不产气,不产生硫化氢(H2S)。置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察,MUG阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生,MUG阴性的应无荧光产生,大肠埃希氏菌O157:H7/NM为MUG试验阴性,无荧光。
三,实验材料:
样品:含有大肠埃希氏菌的水样,某品牌矿泉水
培养基与试剂:改良EC肉汤(mEC+n),改良山梨醇麦康凯琼脂(CT?SMAC),三糖铁琼脂(TSI),营养琼脂,半固体琼脂,月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-MUG(MUGLST),氧化酶试剂,革兰氏染色液,PBS Tween 20洗液,亚碲酸钾(AR 级),头孢克肟(Cefixime),大肠埃希氏菌O157?显色培养基,大肠埃希氏菌O157和H7诊断血清或O157乳胶凝集试剂,鉴定试剂盒?抗E.?coli?O157免疫磁珠。
实验 内容过长,仅展示头部和尾部部分文字预览,全文请查看图片预览。 )做阴性对照,于36?℃士1?℃培养18?h~24h。必要时进行氧化酶试验和革兰氏染色。在TSI琼脂中,典型菌株为斜面与底层均呈黄色,产气或不产气,不产生硫化氢(H2S)。置MUG-LST肉汤管于长波紫外灯下观察,MUG阳性的大肠埃希氏菌株应有荧光产生,MUG阴性的应无荧光产生,大肠埃希氏菌O157:H7/NM为MUG试验阴性,无荧光。挑取可疑菌落.在营养琼脂平板上分纯,于36?℃土1?℃培养18?h~24?h.并进行下列鉴定。
鉴定
血清学实验
在营养琼脂平板上挑取分纯的菌落,用0157和H7诊断血清或O157乳胶凝集试剂作玻片凝集试验。对于H7因子血清不凝集者,应穿刺接种半固体琼脂,检查动力,经连续传代3次,动力试验均阴性,确定为无动力株。如使用***生产的诊断血清或乳胶凝集试剂,应按照产品说明书进行。
生化实验
自营养琼脂平板上挑取菌落,进行生化实验。大肠埃希氏菌O157:H7/NM生化反应特征见下表
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如选择生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统,应从营养琼脂平板上挑取菌落,用稀释液制备成浊度适当的菌悬液,使用生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统进行鉴定。
五,实验结果
综合生化和血清学实验结果,报告25ml某品牌水中检出或未检出大肠埃希氏菌O157:H7或大肠埃希氏菌O157:NM.
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