【B-CN354-I】-一种斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法-v2-1225
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本发明公开了一种斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，包括以下步骤：S1、取干净载玻片用荧光记号笔画直径为1cm的圆圈，在圆圈中加入多聚甲醛，将载玻片放入湿盒中；S2、固定斑马鱼心脏；S3、洗涤；S4、封闭；S5、重复步骤S3；S6、加入一抗，4℃孵育过夜；S7、次日室温放置湿盒；S8、重复步骤S3；S9、加入二抗，室温避光孵育；S10、重复步骤S3；S11、在荧光显微镜或激光共聚焦下成像，拍照记录结果。本发明解决了整鱼做免疫荧光时心脏染不上色，PBST洗涤过程中心脏容易丢失，二抗体孵育后样本不能长期保存以及抗体使用量大的问题，此方法操作简单、抗体用量少、封片后样本可保存两周，在显微镜下直接观察心脏个体，保证了实验的准确性。
/ 1、一种斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取干净载玻片用荧光记号笔画直径为1cm的圆圈，在圆圈中加入50μl4%多聚甲醛，将载玻片放入湿盒中；
S2、在显微镜下取斑马鱼心脏放入4%多聚甲醛中固定；
S3、洗涤；
S4、取50μl，5%BSA加入载玻片圆圈中，放入湿盒中封闭；
S5、封闭后重复步骤S3；
S6、加入50μlPBST配置的一抗（8-OHdG antibody），将载玻片放进湿盒中， 4℃孵育过夜；
S7、次日室温放置湿盒，便于抗体结合；
S8、恢复至室温后重复步骤S3；
S9、加入50μl PBST配置的二抗（FITC Goat Anti-mouse IgG），室温避光孵育；
S10、在显微镜下重复步骤S3；
S11、加入荧光染料，将圆圈中的心脏在荧光显微镜或激光共聚焦下成像，拍照记录结果。
2、如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S2所述的待测样品固定后在显微镜下吸弃4%多聚甲醛，室温干燥，使其完全贴在载玻片上，便于后续洗涤。
3、如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S10S11所述的待测样品中洗涤后弃掉PBST，在圆圈中加入的荧光染料为20μlDAPI，盖上干净的盖玻片后，用密封剂封住盖玻片四周，待其干燥。
4、如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S6所述的待测样品孵育过程不超过16小时。
5、如权利要求1或2任一项所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，步骤S3所述洗涤过程包括待测样品干燥后在显微镜下加入50μlPBST，后吸弃。
6、如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，所述一抗为8-OHdG antibody。
7、如权利要求1所述的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法，其特征在于，所述二抗为FITC Goat Anti-mouse IgG。
一种斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种的斑马鱼胚胎心脏免疫荧光标记法。
背景技术
斑马鱼身体延长而略呈纺锤形，头小而稍尖，吻较短，全身布满多条深蓝色纵纹似斑马，与银白色或金黄色纵纹相间排列纹路比较有条理。在水族箱内成群游动时犹如奔驰于非洲草原的斑马群，故此得斑马鱼之美称。斑马鱼和人类基因有着87%的高度相似性，作为模式生物的优势很突出，这意味着其实验结果大多数情况下适用于人体。常可用于水质环境的监测。同时斑马鱼也是一种常见的观赏鱼。斑马鱼的孵育与繁殖不仅能够带来较大的经济效益同时也具有不可忽略的生物医学研究价值。在斑马鱼的养殖过程中，心脏是最早形成并发挥功能的器官之一，为了准确地判断斑马鱼胚胎心脏发育早期的状态，提高斑马鱼的孵育质量，利用免疫荧光法对心脏中特异性表达物 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 简单、抗体用量少、封片后样本保存时间延长，对斑马鱼的孵育繁殖与生物医学研究有着重要的意义。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
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图 1
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