FDA/PI染色操作步骤
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FDA/PI染色操作步骤
1、溶液配制
（1）0.65mol/L甘露醇配制：称1.1841g甘露醇加入10mL蒸馏水。
（2）5mg/mL FDA配制：称25mgFDA加入1mL丙酮酸溶解，再加入4mL甘露醇，摇匀，避光4℃保存。
（3）2mg/mL PI配制：称2mgPI加入1mL甘露醇，摇匀，4℃保存。
2、染色
（1）从冰箱中取出FDA及PI，复温摇匀，FDA尽量避光。
（2）取羊膜放置于有0.5 ml生理盐水的EP管中，加入8μL PI和10μL FDA，后用0.6ml生理盐水冲洗管壁，室温放置15min.，要求尽量避光；
（3）1.5ml PBS冲洗，取出羊膜，置于载玻片上，用镊子整平，滴加少量PBS，盖上盖某某。
3、镜检
（1）染色完成后，将片子放于小盒中避光，迅速送去检验。
（2）由于荧光显微镜是倒置显微镜，所以，盖某某面 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 射光对侧散射光的散点图。
8. 结果判断：在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高某某，与细胞的类型有关；在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方某某，凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。
注意事项：细胞凋亡时，其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。
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