实验一 MS培养基的配制与灭菌
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实验一 MS培养基的配制与灭菌
一 实验目的
通过对MS培养基的配制和灭菌，掌握培养基的配制和灭菌方法。
二 实验用品与器材
2.1称量与配置用品：电子天平，磁力搅拌器，电热锅，微波炉，烧杯（100ml,500ml ,1000ml）,量筒（100ml ,500ml）,试剂瓶，药匙，称量纸，标签, 酸度计或pH试纸、电炉。
2.2 灭菌用品：包装纸，包装线，镊子，剪刀，手术刀，过滤滤膜，铝盒，灭菌锅。
2.3 主要试剂
MS全套药品（药品清单见附录），MS干粉，琼脂粉，蔗糖，激素（6-BA ,NAA,2,4-D）. 蒸馏水、0.5N NaOH， 0.5N HCl（用于调节培养基PH值）。
三 实验步骤
一、母液的配制
母液是欲配制培养基的浓缩液，一般配成比所需浓度高10—100倍。
优点：
（1）保证各物质成分的准确性；
（2）便于配置时快速移取；
（3）便于低温保藏。
1、MS大量元素母液（50X）
称10升量溶解在200 ml蒸馏水中。配1升培养基取20 ml。
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化学药品
1升量
10升量
①
NH4NO3
1650 mg/L
16．5g
②
KNO3
1900 mg/L
19．0g
③
CaCl2·2H2O
440 mg/L
4．4g
④
MgSO4·7H2O
370 mg/L
3．7g
⑤
KH2PO4
170 mg/L
1．7g
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注：CaCl2·2H2O单独配置
2、MS微量元素母液（100X）
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基母液10ml。
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化学药品
1升量
10升量
①
MnSO4·4H2O
（ MnSO4·H2O）
22．3 mg/L
（21．4 mg/L）
223mg
②
ZnSO4·7H2O
8．6 mg/L
86mg
③
CoCl2·6H2O
0．025mg/L
0．25mg
④
CuSO4·5H2O
0．025 mg/L
0．25mg
⑤
Na2MoO4·2H2O
0．25 mg/L
2．5mg
⑥
KI
0．83 mg/L
8．3 mg
⑦
H3BO3
6．2 mg/L
62 mg
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注：CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量（0．25 mgX10=2．5 mg）或100倍量（25 mg）称取后，定容于100ml水中，每次取10ml或1ml，即含0．25 mg的量。
3、MS铁盐母液（100X）
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基母液10ml。
化学药品
1升量
10升量
Na2·EDTA
37．3 mg/L
373 mg
FeSO4·7H2O
27．8 mg/L
278 mg
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注：配制时，两种成分分别溶解在少量蒸馏水中，其中EDTA盐较难完全溶解，可适当加热。混合时，先取一种置容量瓶（烧杯）中，然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡，至产生深黄色溶液，最后定容，保存在棕色试剂瓶中。
4、MS有机物母液（200X）
称10升量溶解在50ml蒸馏水中。配1升培养基母液5ml。
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化学药品
1升量
10升量
①
烟酸
0．5 mg/L
5mg
②
盐酸吡哆素（VB6）
0．5 mg/L
5mg
③
盐酸硫胺素（VB1）
0.1 mg/L
1mg
④
内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 8KPa时，温度为121℃时，维持15-20分钟，即可达到灭菌的目的。（若灭菌时间过长，会使培养基中的某些成分变性失效。）切断电源，让灭菌锅自然冷却。
注：某些生长调节剂如IAA、ZT、ABA等以及某些维生素遇热是不稳定的，不能同培养基一起高压灭菌，而需要进行过滤灭菌。
附录：
一MS培养基配方
二 植物激素配制
激素名称
缩写
储存液
工作浓度
配制方法
保存
萘乙酸
NAA
2.5mg/ml
1mg/L
先溶于少量1NNaOH,再溶于水。
过滤除菌，4度保存。
6-苄基氨基嘌呤
6-BA
0.25mg/ml
0.1mg/L
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